在《超级玛丽》双人模式中，玩家需选择“2 Players”选项进入游戏。两位玩家分别操控马里奥（1P）和路易吉（2P），轮流进行关卡挑战：1P先开始游戏，当死亡或通关时切换至2P操作，反之亦然。双方共享总生命数，需协作收集金币和道具提升存活率。部分版本（如《新超级马里奥兄弟》）支持实时合作，两人可同时出现在屏幕内，通过踩踏或道具互助避免碰撞干扰。注意角色间无法重叠，需协调移动节奏。双人玩法核心在于交替或同步配合，共同突破关卡。